TY - JOUR JF - The-Neuroscience-Journal-of-Shefaye-Khatam JO - Shefaye Khatam VL - 3 IS - 1 PY - 2015 Y1 - 2015/3/01 TI - Subcloning of NGF Gene into pSecTag2/Hygro Secretory Vector and Expression in PC12 Cell Line TT - ساب کلونینگ ژن NGF در وکتورترشحی pSecTag2/Hygro و بیان آن در سلول‌های ردۀ PC12 N2 - مقدمه: ساب کلونینگ ژن‌های اختصاصی در پلاسمیدها و انتقال آن‌ها به سلول‌های هدف به منظور تولید پروتئین‌های درمانی یا تمایز سلول به عنوان یکی از مؤثرترین روش‌های درمان برای بیماری‌های مختلف پیشنهاد می‌شود. فاکتور رشد عصب (NGF) یکی از اعضای خانواده نوروتروفین‌ها است. نوروتروفین‌ها خانواده‌ای از پروتئین‌ها هستند که میزان بقاء، تمایز و عملکرد انواع مختلف نورون‌ها را تنظیم می‌کنند. مطالعات نشان دادندکه بیان ژن NGF در سلول‌های بنیادی موجب القای تمایز به سمت سلول‌های شبه نورون و رشد آکسون و شاخه‌های آن می‌گردد. مواد و روش‌ها: در این تحقیق هضم آنزیمی بر روی یک پلاسمید حامل ژن NGF انجام گردید و این ژن استخراج شد. ژن NGF در پلاسمید ترشحی pSecTag2 ساب کلون گردید. پلاسمید ساب کلون شده رسوب‌گیری و تغلیظ گردید. سپس با استفاده از لیپوفکتامین به داخل سلول‌های ردۀ PC12 ترانسفکت شد. بیان ژن NGF و تولید پروتئین آن با استفاده از روش‌های RT-PCR و وسترن بلات ارزیابی گردید. یافته‌ها: تعیین توالی نشان داد که فرایند ساب کلونینگ پلاسمید ترشحی درست بوده است. بیان ژن NGF در سلول‌های ترانسفکت شده PC12 به وسیلۀ روش RT-PCR نشان داده شد و تولید پروتئین آن در نتایج وسترن بلات اثبات شد. نتیجه گیری: ساب کلونینگ ژن NGF بر روی وکتور ترشحی pSecTag2 یک روش مناسب جهت انتقال به سلول‌های یوکاریوتی می‌باشد. SP - 21 EP - 28 AU - Jalali Kondori, Bahman AU - Asadi, Mohammad Hossein AU - Azemati, Fateme AD - Department of Anatomical Sciences, School of Medicine, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. KW - Transfection KW - Genetic Vectors KW - Nerve Growth Factors KW - PC12 Cells UR - http://shefayekhatam.ir/article-1-645-fa.html DO - 10.18869/acadpub.shefa.3.1.21 ER -