fa ساب کلونینگ ژن NGF در وکتورترشحی pSecTag2/Hygro و بیان آن در سلول‌های ردۀ PC12 نوروبيولوژي مولكولي Molecular Neurobiology پژوهشي Research --- Open Access, CC-BY-NC <p style="text-align: justify;"><strong>مقدمه:</strong> ساب کلونینگ ژن‌های اختصاصی در پلاسمیدها و انتقال آن‌ها به سلول‌های هدف به منظور تولید پروتئین‌های درمانی یا تمایز سلول به عنوان یکی از مؤثرترین روش‌های درمان برای بیماری‌های مختلف پیشنهاد می‌شود. فاکتور رشد عصب (NGF) یکی از اعضای خانواده نوروتروفین‌ها است. نوروتروفین‌ها خانواده‌ای از پروتئین‌ها هستند که میزان بقاء، تمایز و عملکرد انواع مختلف نورون‌ها را تنظیم می‌کنند. مطالعات نشان دادندکه بیان ژن NGF در سلول‌های بنیادی موجب القای تمایز به سمت سلول‌های شبه نورون و رشد آکسون و شاخه‌های آن می‌گردد. <strong>مواد و روش‌ها:</strong> در این تحقیق هضم آنزیمی بر روی یک پلاسمید حامل ژن NGF انجام گردید و این ژن استخراج شد. ژن NGF در پلاسمید ترشحی pSecTag2 ساب کلون گردید. پلاسمید ساب کلون شده رسوب‌گیری و تغلیظ گردید. سپس با استفاده از لیپوفکتامین به داخل سلول‌های ردۀ PC12 ترانسفکت شد. بیان ژن NGF و تولید پروتئین آن با استفاده از روش‌های RT-PCR و وسترن بلات ارزیابی گردید. <strong>یافته‌ها:</strong> تعیین توالی نشان داد که فرایند ساب کلونینگ پلاسمید ترشحی درست بوده است. بیان ژن NGF در سلول‌های ترانسفکت شده PC12 به وسیلۀ روش RT-PCR نشان داده شد و تولید پروتئین آن در نتایج وسترن بلات اثبات شد. <strong>نتیجه گیری:</strong> ساب کلونینگ ژن NGF بر روی وکتور ترشحی pSecTag2 یک روش مناسب جهت انتقال به سلول‌های یوکاریوتی می‌باشد.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Introduction:</strong> Subcloning of specific genes in plasmids and transfecting them into target cells for producing therapeutic proteins or cell differentiation, is suggested as one of the most effective treatment methods for different diseases. Nerve growth factor&nbsp;(NGF) is one of the members of the neurotrophin family. Neurotrophins&nbsp;are a&nbsp;family&nbsp;of proteins that regulate the survival, differentiation, and function of different types of neurons. Studies showed that NGF gene expression in stem cells induces differentiation toward neuron-like cells as well as the growth of axons and its branching. <strong>Materials and Methods:</strong> In this research, enzymatic digestion on a plasmid carrying NGF gene was performed and extracted. NGF gene was subcloned into pSecTag2/Hygro secretory plasmid. The subcloned plasmid was precipitated and concentrated. It was then transfected by Lipofectamine into PC12 cell line. NGF gene expression and protein production were evaluated using RT-PCR and western blot methods. <strong>Results:</strong> Sequence determination indicated that secretory plasmid subcloning process has been correct. Expression of NGF gene in transfected PC12 cells was shown by RT-PCR method and production of its protein was proved by the results from western blots. <strong>Conclusion:</strong> Subcloning of NGF gene in pSecTag2 secretory vector is a suitable technique for transfer to eukaryotic cells.</p> ترانسفکشن, ناقلین ژنتیکی, فاکتورهای رشد عصبی, سلول‌های PC12 Transfection, Genetic Vectors, Nerve Growth Factors, PC12 Cells 21 28 http://shefayekhatam.ir/browse.php?a_code=A-10-24-515&slc_lang=fa&sid=1 Bahman Jalali Kondori بهمن جلالی کندری Bahmanjalali2010@gmail.com 10031947532846009561 10031947532846009561 Yes Department of Anatomical Sciences, School of Medicine, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران. Mohammad Hossein Asadi محمد حسین اسدی 10031947532846009562 10031947532846009562 No Department of Anatomical Sciences, School of Medicine, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران. Fateme Azemati فاطمه عظمتی 10031947532846009563 10031947532846009563 No Department of Biology, School of Basic Sciences, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran. گروه بیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.