fa ساخت وایروزوم کاتیونیک مشتق شده از ویروس وزیکولار استوماتیتیس به عنوان کاندید امیدوارکننده به منظور تحویل موثر ژن به سیستم عصبی مرکزی تحقیقات پایه در علوم اعصاب Basic research in Neuroscience پژوهشي Research --- Open Access, CC-BY-NC <strong>مقدمه: </strong>امروزه یکی از موانع ژن درمانی در درمان بیماری‌های سیستم اعصاب مرکزی، نبود سیستم‌های حامل مناسب و ایمن برای عبور از سد خونی مغزی است. وایروزوم‌ها ذرات شبه ویروسی بوده که اگر از ویروس‌های نوروتروپیک ساخته شوند، می‌توانند در مغز مورد استفاده قرار گیرند. هدف از این مطالعه ساخت وایروزوم کاتیونیک مشتق شده از ویروس وزیکولار استوماتیتیس با استفاده از فسفولیپید کوتاه زنجیر با قابلیت دیالیز و لیپید کاتیونیک در شرایط آزمایشگاهی می باشد. <strong>مواد و روش‌ها: </strong>ویروس وزیکولار استوماتیتیس در رده سلولی Vero تکثیر شد. متعاقباً، ویروس تولید شده با استفاده از اولترافیلتراسیون و اولتراسانتریفیوژ تغلیظ و تخلیص گردیده و در نهایت، وایروزوم توسط دترجنت DCPC و افزودن لیپید کاتیونیک، سنتز شد. توزیع سایز نانوذرات وایروزوم، میزان سمیت سلولی و پروتئین VSV-G به ترتیب توسط اندازه‌گیری پراکندگی نور دینامیک با استفاده از دستگاه زتا سایزر، روش زنده‌مانی سلولی و سدیم دو دسیل سولفات پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز (SDS-PAGE) آنالیز شد.<strong> یافته‌ها: </strong>ویروس‌های تولید شده با روش اولترافیلتراسیون و اولتراسانتریفیوژ تغلیظ گردیده و غلظت نهایی وایروزوم 0/8 میلی‌گرم در میلی‌لیتر شد. سایز وایروزوم کاتیونیک 186/6 نانومتر بود و بقای سلولی پس از 48 ساعت درمان با غلظت‌های مختلف وایروزوم کاتیونیک در مقایسه با گروه کنترل، کاهش معنی‌داری داشت. پروتئین VSV-G با وزن مولکولی 63 کیلودالتون نیز از طریق SDS-PAGE تایید گردید. <strong>نتیجه‌گیری: </strong>استفاده از فسفولیپید کوتاه زنجیر یک روش مؤثر در حل کردن و بازآرایی پوشش ویروس وزیکولار استوماتیتیس بوده و در گلیکوپروتئین سطحی ویروس (VSV-G) تغییری ایجاد نمی‌کند. این وایروزوم کاتیونیک به دلیل دارا بودن پروتئین VSV-G و تروپیسم وسیع سلولی، می‌تواند کاندید امیدوارکننده‌ای برای عبور از سد خونی مغزی جهت تحویل مؤثر ژن و درمان بیماری‌های سیستم اعصاب مرکزی باشد. <strong>Introduction:</strong> Nowadays, one of the barriers of gene therapy in the treatment of the CNS diseases is the lack of proper and safe carrier systems to cross the blood brain barrier (BBB). Virosomes are virus like particles which can be used in brain if made from neurotropic viruses. The aim of the study was to construct cationic virosomes derived from vesicular stomatitis virus using dialyzable short chain phospholipid (DCPC) and cationic lipid (DOTAP) in-vitro. <strong>Materials and Methods: </strong>The vesicular stomatitis virus was propagated in Vero cell line. Subsequently, the harvested virus was concentrated and purified using ultrafiltration and ultracentrifugation and finally, the virosome was synthesized by DCPC detergent and the addition of cationic lipid. Particle size distribution of virosome nanoparticles, cellular cytotoxicity and glycoprotein of vesicular stomatitis virus (VSV-G) were determined by measuring dynamic light scattering using zetasizer, MTT assay and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), respectively. <strong>Results: </strong>The harvested viruses were concentrated and purified by ultrafiltration and ultracentrifugation and the final concentration was 0.8 mg/ml. The cationic virosome mean size was 186.6 nm and, the cell viability was significantly decreased after 48 hours of treatment with different concentrations of virosome compared to the control group. The VSV-G protein with molecular weight of 63 kDa was approved by SDS-PAGE. <strong>Conclusion:</strong> The use of DCPC is an efficient method for solubilization and reconstruction of vesicular stomatitis virus envelope and does not alter the surface VSV-G. Due to the VSV-G protein and its wide range cell tropism, this cationic virosome can also be a promising candidate for crossing the BBB in order to efficient gene delivery and therapy of CNS diseases. وایروزوم, سیستم اعصاب مرکزی, روش‌های کشت سلولی Virosomes, Central Nervous System, Cell Culture Techniques 72 81 http://shefayekhatam.ir/browse.php?a_code=A-10-24-1403&slc_lang=fa&sid=1 Delaram Ahmadi دلارام احمدی 100319475328460019131 100319475328460019131 No Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب شناسی، واحد قم، دانشگاه آزاد اسلامی، قم، ایران Mohsen Zargar محسن زرگر zmohsen2002@yahoo.com 100319475328460019132 100319475328460019132 No Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب شناسی، واحد قم، دانشگاه آزاد اسلامی، قم، ایران Mohammad Reza Zolfaghari محمد رضا ذوالفقاری 100319475328460019133 100319475328460019133 No Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب شناسی، واحد قم، دانشگاه آزاد اسلامی، قم، ایران Monireh Kazemimanesh منیره کاظمی منش 100319475328460019134 100319475328460019134 No Department of Virology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه ویروس شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Amir Ghaemi امیر قائمی ghaem_amir@yahoo.com 100319475328460019135 100319475328460019135 Yes Department of Influenza and other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه آنفلوانزا و ویروس‌های تنفسی شایع، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران