ساب کلونینگ ژن NGF در وکتورترشحی pSecTag2/Hygro و بیان آن در سلولهای ردۀ PC12
|
بهمن جلالی کندری*، محمد حسین اسدی، فاطمه عظمتی |
گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران. ، Bahmanjalali2010@gmail.com |
|
چکیده: (7690 مشاهده) |
مقدمه: ساب کلونینگ ژنهای اختصاصی در پلاسمیدها و انتقال آنها به سلولهای هدف به منظور تولید پروتئینهای درمانی یا تمایز سلول به عنوان یکی از مؤثرترین روشهای درمان برای بیماریهای مختلف پیشنهاد میشود. فاکتور رشد عصب (NGF) یکی از اعضای خانواده نوروتروفینها است. نوروتروفینها خانوادهای از پروتئینها هستند که میزان بقاء، تمایز و عملکرد انواع مختلف نورونها را تنظیم میکنند. مطالعات نشان دادندکه بیان ژن NGF در سلولهای بنیادی موجب القای تمایز به سمت سلولهای شبه نورون و رشد آکسون و شاخههای آن میگردد. مواد و روشها: در این تحقیق هضم آنزیمی بر روی یک پلاسمید حامل ژن NGF انجام گردید و این ژن استخراج شد. ژن NGF در پلاسمید ترشحی pSecTag2 ساب کلون گردید. پلاسمید ساب کلون شده رسوبگیری و تغلیظ گردید. سپس با استفاده از لیپوفکتامین به داخل سلولهای ردۀ PC12 ترانسفکت شد. بیان ژن NGF و تولید پروتئین آن با استفاده از روشهای RT-PCR و وسترن بلات ارزیابی گردید. یافتهها: تعیین توالی نشان داد که فرایند ساب کلونینگ پلاسمید ترشحی درست بوده است. بیان ژن NGF در سلولهای ترانسفکت شده PC12 به وسیلۀ روش RT-PCR نشان داده شد و تولید پروتئین آن در نتایج وسترن بلات اثبات شد. نتیجه گیری: ساب کلونینگ ژن NGF بر روی وکتور ترشحی pSecTag2 یک روش مناسب جهت انتقال به سلولهای یوکاریوتی میباشد. |
|
واژههای کلیدی: ترانسفکشن، ناقلین ژنتیکی، فاکتورهای رشد عصبی، سلولهای PC12 |
|
متن کامل [PDF 628 kb]
(2733 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
نوروبيولوژي مولكولي
|
|
|
|